оборудование:
1. Счетная камера Горяева;
2. Микроскоп.
Разводят исследуемую кровь в 200 раз. Для этого в сухую пробирку
отмеривают 4 мл реактива 1 или 2. Пипеткой набирают 0,02 мл крови. Кончик
пипетки вытирают фильтровальной бумагой или марлей и кровь выдувают на дно
пробирки, пипетку тщательно промывают в верхнем слое жидкости, повторно
набирая ее и выдувая в пробирку, содержимое пробирки перемешивают и
оставляют стоять до момента счета.
Подготавливают счетную камеру: протирают насухо камеру с сеткой и
покровное стекло, затем покровное стекло притирают к камере, слегка
надавливая на стекло таким образом, чтобы по краям его появились радужные
полосы (это свидетельствует о требуемой высоте камеры - 0,1 мм).
Заполняют счетную камеру разведенной кровью: предварительно несколько
раз тщательно встряхивают содержимое пробирки, затем стеклянной палочкой
отбирают каплю разведенной крови и подносят ее к краю покровного стекла,
следя за тем, чтобы она равномерно без пузырьков воздуха заполнила всю
поверхность камеры с сеткой, не затекая в бороздки. Заполненую камеру
оставляют в горизонтальном положении 1 мин (для оседания эритроцитов).
Для подсчета эритроцитов, не меняя горизонтального положения камеры,
помещают ее на столик микроскопа (объектив 8 х, окуляр 10 х) находят
верхний левый край сетки. Счет производят в 5 больших квадратах,
разделенных на 16 малых, т. е. в 80 малых квадратах.
Рекомендуется считать клетки в квадратах сетки, расположенных по
диагонали. Для того чтобы одни и те же эритроциты, лежащие на линиях, не
попали дважды в счет, принято для каждого квадрата считать расположенные на
определенных двух линиях.
Расчет количества эритроцитов в 1 мкл крови производят, исходя из
разведения крови (200), числа сосчитанных квадратов (80) и объема 1 малого
квадрата ( 1 мкл), по следующей формуле:
4000
Х = а ( 4000 ( 200 , где
80
Х - число эритроцитов в 1 мкл крови;
а - число сосчитанных эритроцитов.
В результате сокращения Х = а ( 10000 (Меньшиков, 1987).
2.5. Определение общего билирубина
Метод Ендрасика - Грофа (1972). Принцип. Под воздействием HCI
разрывается тетрапироловая связь билирубина и образуются два дипиррола,
которые диазотируются диазобензосульфоновой кислотой с образованием
розового-фиолетового азобилирубина. Связанный билирубин реагирует быстро,
несвязанный билирубин реагирует после добавления кофеинового реактива.
Реактивы: 1. Кофеиновый реактив 1,75 мл;
2. Диазосмесь 0,25 мл;
3. Сыворотка 0,5 мл.
В две пробирки (одна опытная и одна холостая) вводят сыворотку и
реактивы. Для холостой пробы требуется: 0,5 мл сыворотки, 1,75 мл
кофеинового реактива и 0,25 мл раствора хлорида натрия. Для определения
общего билирубина пробу оставляют стоять 20 мин, после чего измеряют на
фотометре. При дальнейшем стоянии краска не изменяется. Измерение проводят
при длине волны 500-560 нм в кювете с толщиной слоя 0,5 см против воды. Из
показателя общего билирубина вычитают показатель холостой пробы. Расчет
производят по калибровочному графику.
Построение калибровочного графика. Калибровочный график строится по
готовому набору реактивов “Билирубин-эталон” (“Лахема”). Набор Био-Ла-Тест
“Билирубин-эталон” включает:
1.Билирубин лиофилизированный;
2. Альбумин лиофилизированный;
3. Калибровочная линейка до 170 мкмоль/л.
2.6. Определение прямого билирубина
Реактивы: 1. Сыворотка 0,5 мл;
2. Раствор хлорида натрия 1,75 мл;
3. Диазосмесь 0,25 мл.
В две пробирки (одна опытная и одна холостая) вводят реактивы. Для
определения связанного билирубина измерение проводят спустя 5-10 мин после
добавления диазосмеси, так как при длительном стоянии в реакцию вступает
несвязанный билирубин.
Измерение проводят при длине волны 500 - 560 нм в кювете с толщиной
слоя 0,5 см против воды. Из показателей, полученных при измерении
связанного билирубина, вычитают показатель холостой пробы. Расчет
2.7. Определение непрямого билирубина
В сыворотке крови на долю непрямого билирубина приходится 75%. Исходя
из этого, находим НБ по формуле:
НБ = ОБ - ПБ.
2.8. Методы статистической обработки результатов
Полученные данные были обработаны статистически (Лакин, 1980).
Применялся параметрический метод вариационной статистики.
1. Нахождение среднего арифметического значения членов совокупности (М)
и среднего квадратичного оклонения (m) велось по формуле:
М = ( ; ( = ( ( ( ( a2
n n - 1 ,
где ( - сумма вариант;
n - число вариант;
( - среднее квадратичное отклонение.
2. Определение m - средней квадратичной ошибки:
m = ( (
( n
3. Определение критерия достоверности (t) велось по Стьюденту:
t = М1 - М2
( m12 + m22
III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Сравнительная характеристика показателей периферической крови у
новорожденных с ГА по АВО-системе, пролеченных консервативным путем
Как видно из таблицы 1, при ГА новорожденных по АВО-системе, среднее
количество эритроцитов и ПБ существенно не изменялось до и после лечения и
составляли: эритроциты 4,4 ( 0,16 ( 1012 л и 4,3 ( 0,12 ( 1012 л, ПБ 14,19
( 4,68 ( 1012 л и 9,00 ( 2,40 ( 1012 л. В пик заболевания повышение ПБ не
наблюдалось.
При консервативном лечении новорожденных с ГА по АВО-системе
происходило стабильное достоверное (р<0,05) снижение Hb при рождении, в пик
заболевания и при выписке 189,39 ( 5,54 г/л, 183,50 ( 5,29 г/л и 169,45 (
5,07 г/л соответственно. По аналогии, мы наблюдали достоверное (р<0,01)
снижение Ht с 59,29 ( 1,97 % до 51,45 ( 1,59 %.
Напротив, в пик заболевания наблюдалось незначительное повышение ОБ с
187,05 ( 15,93 мкмоль/л до 213,95 ( 13,06 мкмоль/л, а при выписке резкое
достоверное (р<0,001) снижение этого параметра до136,60 ( 8,15 мкмоль/л.
По показателю НБ мы наблюдали небольшой подъем к середине заболевания
с 172,25 ( 15,68 мкмоль/л до 199,25 ( 11,77 мкмоль/л. В результате лечения
эти цифры достоверно (р<0,001) снизились до 126,80 ( 8,12 мкмоль/л.
Таблица 1
Показатели периферической красной крови у детей с ГБН
по АВО-системе (n = 20)
|Период | | | |
|заболевания | | | |
| |I |II |III |
| | | | |
|Показатели | | | |
|Hb, г/л |189,39 ( 5,54 |183,50 ( 5,29 |169,45 ( 5,07 |
| | |(( |(((, *(II,III) |
|Ht, % |59,29 ( 1,97 |55,09 ( 1,76 |51,45 ( 1,59 |
| | |(( |(((, **(I,III) |
|Эритроциты, |4,44 ( 0,16 |- |4,30 ( 0,12 |
|1012л | | |(( |
|ОБ,мкмоль/л |187,05 ( 15,93 |213,95 ( 13,06 |136,60 ( 8,15 |
| |((( | |((, ***(II,III),|
| | | |**(I,III) |
|ПБ,мкмоль/л |14,19 ( 4,68 |12,44 ( 3,73 |9,00 ( 2,40 |
|НБ,мкмоль/л |172,25 ( 15,68 |199,25 ( 11,77 |126,80 ( 8,12 |
| |((( | |(((, |
| | | |***(II,III), |
| | | |*(I,III) |
Примечание: период заболевания - I - рождение, II - пик
заболевания, III - выписка; достоверность различий внутри группы - * р <
0,05; ** р < 0,01; *** р < 0,001. Достоверность различий между группами
новорожденных с ГБН по АВО-системе и Rh-фактору (таб.2) и АВ-системе
(таб.1) - (( р < 0,01; ((( р < 0,001;
n - количество детей в группе.
3.2. Сравнительная характеристика показателей периферической крови у
новорожденных с ГА по АВО-системе и Rh-фактору пролеченных оперативным и
консервативным путем
При ГА новорожденных по АВО системе и Rh фактору (таблица 2) среднее
количество эритроцитов и ПБ до и после лечения не изменялось: эритроциты
составляли 4,11( 0,16 ( 1012 л - 3,81 ( 0,12 ( 1012, ПБ 14,78 ( 4,80
мкмоль/л - 14,53 ( 3,31 мкмоль/л с небольшим увеличением в пик заболевания
26,04 ( 5,79 мкмоль/л.
Количество Нb у новорожденных резко снизилось в пик заболевания 183,66
( 7,37 г/л - 161,78 ( 5,92 г/л (р<0,05), и еще более резко снизилось к
моменту выписке 139,81 ( 5,92 %, достоверность (р<0,001). Соответственно
произошло и резкое снижение Нt к середине заболевания с 54,78 ( 2,42 % до
48,22 ( 1,88 % (р<0,05) и к моменту выписке до 40,93 ( 1,79 %,
достоверность (р<0,001).
Как видно из таблицы 2, произошло значительное повышение ОБ с 84,70 (
13,83 мкмоль/л до 191,67 ( 21,99 мкмоль/k в пик заболевания достоверность
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10
