Было продемонстрировано, что этот метод даёт лучшие результаты -

относительно культивирования в бульоне и приготовления влажной камеры,

поскольку способен определять T.vaginalis в концентрациях менее 3

организмов в 1 мл. Однако культивирование в культуре - это не простой

рутинный метод; он дорог и неудобен для быстрой диагностики[5,9,

14,15,22,29,36,37]

1.4.3 Иммунологические методы

Ограничения культуральных и микроскопических методов для выявления

T.vaginalis заставили учёных развивать альтернативные методы, которые могут

определять антиген, антитело или нуклеиновые кислоты в уретральном или

вагинальном экссудате. Иммунологические методы не получили должного

распространения из-за отсутствия качественных отечественных тест-систем.

Кроме этого, все методы серологической диагностики T.vaginalis мало

информативны, т. к данный антиген не вызывает 100%-го иммунного ответа.

Хотя для подтверждения диагноза ими можно воспользоваться. Используются

различные методы определения антител: агглютинация, непрямая

гемаглютинация, диффузия в геле, флюоресценция антител и иммуноферментный

анализ, метод иммуноблотинга. Определённое диагностичическое значение имеет

прямое определение специфических белков T.vaginalis в биопробах с

использованием моноклональных антител в качестве быстрого метода

диагностики трихомоноза. Прямой иммуноферментный и иммунофлюоресцентный

анализ мазков вагинального соскоба (тест-система фирмы California

Integrated Diagnostics, Benicia, Calif.), использующий перокидазо - и

флюорохром - меченые смеси моноклональных антител к различным структурам

T.vaginalis был таким же чувствительным и специфичным, как и используемый

культуральный метод. К тому же результаты определения возбудителя

трихомоноза получают в течение одного часа, что позволяет произвести

экспресс-скрининг [10,17,35,41,42].

1.4.4 Методы генной диагностики T.vaginalis

С начала 90-х годов в лабораторную клиническую практику стали,

внедрятся технологии определения видоспецифических нуклеотидных

последовательностей областей ДНК (мишеней) бактерий и клеток высших

организмов. Сначала это была ДНК-гибридизационная технология. В тест-

системе Affirm VP используются синтетические зонды для выявления как

Gardnerella vaginalis, так и T.vaginalis из одного вагинального соскоба.

Данная методика лучше, чем метод влажной камеры. Тем не менее, встречались

ложноотрицательные результаты при её сравнении с культуральным методом (80%

чувствительности относительно положительных образцов в культуре). Одна из

гибридизационных методик - “дот-блот” гибридизация, в которой использовался

фрагмент 2,3 ДНК T.vaginalis в качестве зонда, могла определить ДНК

T.vaginalis в вагинальном секрете. Однако нестабильность зонда, выполнение

специфических технических приёмов, особенно использование радиоактивной

метки, являлись большими недостатками этой методики. После того как

радиоактивно меченный зонд заменили на флюоресцентно-меченный ДНК-зонд, эта

методика сразу нашла своё применение при выявлении бессимптомного

носительства T. vaginalis. Новая генодиагностическая технология - ПЦР, в

последнее время опережает остальные методы генодиагностики трихомоноза и

наравне с культуральным методом широко используется в клинической практике.

Риу в 1999 г. предложили ПЦР методику идентификации ДНК влагалищной

трихомонады с праймерами для амплификации повторяющегося фрагмента TV-E650.

Сравнив свой метод с другими используемыми методиками диагностики:

микроскопией нативного мазка, культуральным, а также с клиническими

данными. Он считает, что предложенный метод ПЦР на 100% чувствителен и

специфичен, т.к. не давал перекрёстной реакции с другими простейшими и

Candida albicans. Использованная им методика ПЦР в два раза чаще выявляла

трихомонаду, чем другие лабораторные методики. Японские учённые так же

сумели подтвердить правомерность постановки диагноза “трихомониаз” в 19-ти

случаях у женщин и в одном случае у мужчины методом ПЦР[43,44,45,46,48].

5. Лечение трихомоноза

Препарат выбора - метронидазол, или его аналог. Препарат назначают

внутрь, внутривенно или внутривагинально. Эффективность химиотерапии

достигает 80-95%. В последнее время чаще рекомендуется применять

комплексную терапию, с использованием новейших препаратов, к примеру,

таких, как Наксоджин. Кроме этого советуют проводить местную

обработку слабыми дезинфекторами и растворами, снимающими воспаление.

Причина данной терапии обусловлена адаптационными механизмами

трихомонад. В силу чего сегодня редкий врач владеет методикой

эффективного лечения этой патологии [1,2,18,25].

2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Все исследования по теме квалификационной работы проводились на базе

Одесского областного кожно-венерологического диспансера, расположенного по

адресу: г. Одесса, ул. Воробьева, 5.

В исследовании, которое проходило в период с декабря 2003 года по май

2004 года, принимали участие исключительно мужчины в количестве 150

человек. Пациенты были обследованы на трихомоноз тремя методами:

культуральным, микроскопии окрашенного мазка и ПЦР.

Всем обследуемым, за сутки до взятия материала производилась

внутримышечная инъекция пирогенала, в дозе – 50 МПД, согласно инструкции

приведенной [18]. Вследствие чего на момент анализа у 60% больных

отмечались слизистые, слизисто – гнойные выделения.

2.1. Исследование культуральным методом.

Культуральный метод исследования заключался в посевах патологического

материала (отделяемого уретры) на ИПС, по методике [21]. Использовалась

питательная среда для выделения влагалищных трихомонад (Э).

Следующего состава, г/л:

ферментолизат биомассы микроорганизмов без оболочек

(осветлённый)

14,2

мальтоза

8,0

хлорид натрия

6,0

хлорид калия

0,1

карбонат натрия

1,2

РН среды доводился до 6,0 ± 0,2.

Препарат разработан ЦКВИ, выпускается НПО “ Питательные среды“.

Материал выделений и соскоб забираются ложечкой Фолькмана, если

выделения обильные, то можно использовать бактериологическую петлю, при

этом для увеличения отделяемого, левой рукой производится массаж уретры

выжимающими приёмами (дистально-проксимальное направление). При посеве

ложечка Фолькмана с посевным материалом опускается в среду до дна пробирки

и энергично круговыми движениями смывается. Пробирка у спиртовки

закрывается ватно-марлевой пробкой и ставится на инкубацию при 37 градусах

Цельсия.

Учёт результатов проводился путём микроскопического исследования

препаратов через 7 дней после посева. Осадок отбирался пастеровской

пипеткой и микроскопировался в тёмном поле с увеличением 280. При

положительном результате наблюдались движущиеся паразиты: одиночные или в

скоплениях. Все препараты смотрелись нативными.

2.2. Исследование методом микроскопии мазка.

Метод микроскопии мазка основан на анализе соскоба или выделений, с

последующей их окраской, методика[39]. Соскоб берется желобоватым зондом

или тупой ложечкой из уретры. Из ложечки биологический материал извлекался

копьём для перфорации кожного покрова. Выделения брались мазком –

отпечатком.

Стекла обрабатывались так же, как и посуда, бывшая в употреблении,

мылись и кипятились 15 минут в 0,5% мыльном растворе, затем многократно

ополаскивались в горячей воде и не менее 5 раз в дистиллированной. После

этого сушились в сухожаровом шкафу. Далее натирались между двумя дощечками

с прикреплённой тканью и помещались до опыта в смесь спирта с эфиром 1:1.

(Чистота стёкол в подобной диагностике имеет важное значение!)

Отобранный материал эмульгировался (очень нежно) на предметном стекле,

после чего высушивался на воздухе 20-30 минут, затем окрашивался – 1%

раствором метиленового синего, в течении 3 минут. В положительных случаях,

обнаруживались трихомонады различной формы. Не больше одной в поле зрения.

Ядро окрашивалось в темно – синий, а протоплазма – в бледно-синий

цвет. Трихомонады имели: овальную, круглую и грушевидную формы. Препарат

смотрелся при увеличении 630 с иммерсионным объективом.

2.3 Исследование методом ПЦР

Для ПЦР – диагностики использовались соскобы уретры.

Все анализы на основе этого метода по группам больных проводились

сотрудниками кафедры Кожных и венерических болезней Одесского

Государственного Медицинского Университета.

Результаты обследованных были любезно предоставлены

{XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX

XXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXX}! Простите этого человека не указываю!

3.РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В ходе проведения собственных исследований по сравнению различных

методов диагностики трихомоноза у мужчин, общее количество которых

составляло 150 человек, были получены следующие результаты: наиболее

удачным методом диагностики трихомоноза является метод микроскопии

окрашенного мазка. Его информативность составила 71%. За ним следует метод

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6