Наиболее доступный и точный метод, так как типичные трихомонады нельзя

спутать другими микроорганизмами и клетками, встречающимися в мочеполовых

органах. Нативный препарат готовят методом висячей или раздавленной капли.

Густое отделяемое разбавляют теплым изотоническим раствором хлорида

натрия, чтобы облегчить перемещение трихомонад. Активная подвижность,

присущая трихомонадам во влагалищном секрете, выделяемом мужской уретры

наблюдается редко. Чаще отмечаются толчкообразные движения или только

колебания жгутиков и ундулирующей мембраны. Препараты рассматривают в

обычном микроскопе со слегка спущенным и задиафрагмированным конденсором

Аббе, в результате чего создается необходимая контрастность. Используют

также конденсоры темного поля и фазово-контрастной микроскопии.

Иногда для более рельефного выделения трихомонад нативному препарату

добавляют каплю раствора Люголя, флюоресцеина. Прекратившее движение или

малоподвижные трихомонады в нативных препаратах не распознаются. Кроме

того, движения трихомонад быстро прекращаются при охлаждении и высыхании

препарата, поэтому мазки необходимо исследовать сразу же после получения

материала[9,14,15,37].

1.4.1.3 Микроскопия окрашенных препаратов

Удобно, поскольку не требует немедленного изучения взятых мазков. В них

удается различить не только типичные подвижные, но и малоподвижные

(амебоидные) трихомонады, в нативных же препаратах выявление атипичных

паразитов, не обладающих, как правило, активной подвижностью, весьма

затруднительно.

Разработаны различные методы окраски. Одни из них позволяют рассмотреть

органоиды паразита, но из-за сложности их используют лишь при научных

исследованиях (например, окраска по Гейденгану). Другие методы, более

простые (по Лейшману, по Романовскому - Гимзе), н всегда позволяют отличить

жгутики, аксостили и блефанопласты, которые служат опознавательными

признаками трихомонад. Многие предпочитают окраску метиленовым синим. Опыт

проведения микроскопии позволяет утверждать, что в правильно окрашенных

метиленовым синим мазках подвижные (типичные) трихомонады имеют достаточно

характерный вид. Однако диагностика атипичных (амебоидных) трихомонад более

сложна и ответственна, требует большей осторожности и иногда оставляет

место для сомнения. Вот почему при обнаружении атипичных форм следует

воздержаться от категорического заключения, которое может быть причиной

гипердиагностики. Приготовление мазка: выделения наносят на чистое

предметное стекло и осторожно размазывают по нему другим стеклом. При

грубом размазывании столь нежные клетки как трихомонады, легко

раздавливаются, что затрудняет их распознавание. При фиксации над пламенем

трихомонады также деформируются. После забора материала слегка высушенные

на воздухе не фиксированные препараты сразу же окрашиваются 1% водным

раствором метиленового синего в течение двух – трех минут, а затем

промывают обычной водой и высушивают на воздухе.

Окрашенные метиленовым синим «типичные трихомонады» имеют нежную

сетчатую, пенистую цитоплазму светло-голубого цвета. Интенсивно окрашенный

перипласт четко очерчивает границы тела. Компактное темно-синее с

фиолетовым оттенком маленькое ядро находится обычно у переднего конца тела,

реже в центре. Оно имеет форму косточки сливы или неправильную форму и не

превышает 1/3 длины тела. В цитоплазме содержатся вакуоли, наиболее крупные

из которых располагаются вблизи ядра. В них могут быть заключены бактерии и

пищевые частицы. В цитоплазме видны также темные гранулы диаметром 0,2 – 1

мкм. Длина колеблется от 12 до 30 мкм и более. Хотя жгутики и другие

органоиды не видны (лишь изредка окрашивается аксостиль), а препарат имеет

однотипную окраску, эти особенности позволяют легко дифференцировать

трихомонады от клеток эпителия, а также лейкоцитов с бледной, равномерно

окрашенной цитоплазмой и круглым или овальным ядром в центре.

Иначе выглядят атипичные, амебоидные трихомонады. Они различаются по

форме и величине, но преобладают особи круглой или овально формы, диаметром

15 – 35 мкм и более. Границы тела четко очерчены тонкой, синей линией

перипласта. Цитоплазма еще более светлая из-за большого количества вакуолей

с отдельными включениям и зернами, иногда скапливающимися около ядра.

Овальное или неправильной формы, реже круглое ядро составляют половину

длины тела паразита, располагаясь эксцентрично. Оно окрашивается не столь

интенсивно, но, как правило, четко отделено от цитоплазмы. В ядре видны

немногочисленные глыбки хроматина и светлая строма. В вакуолях не редко

заметны захваченные бактерии и клеточные обломки. По этому описанию легко

отличить трихомонады от мононуклеарных лейкоцитов и клеток эпителия. Трудно

дифференцировать амебоидные трихомонады от макрофагов с дегенеративными

изменениями. Правда, такие макрофаги почти никогда не встречаются в уретре.

Лишь при остром гонококковом воспалении изредка обнаруживают макрофаги и

двуядерные плазматические клетки. Макрофаги располагаются скоплениями,

количество их увеличивается в начале периода выздоровления, вакуолизация

бывает только при очень высокой вирулентности бактерий, которые обычно не

инфицируют уретру. Трихомонады, как правило, единичные в поле зрения, после

выздоровления исчезают, экссудат часто не содержат микробов, у них не

бывает очень больших вакуолей. Ядро макрофага круглое, овальное или

бобовидное, относительно гомогенное: иногда в нем видно одно или несколько

ядрышек, общая окраска его темная. Ядро трихомонады, наоборот, состоит из

нескольких отчетливо различающихся глыбок хроматина, заключенных в общую

оболочку с более светлой стромой.

Подтверждением того, что указанные выше клетки являются трихомонадами

атипичной (амебовидной), формы, служат следующие факты:

Их находят одновременно с типичными паразитами, а

также у тех больных, у которых подвижность трихомонад

отсутствует, но которые являлись источником заражения

трихомонозом нескольких человек.

1. Они исчезают после противотрихомонадного лечения и

появляются вновь лишь при рецидивах и реинфекциях.

2. Метронидазол (трихопол) эффективен при лечении больных,

у которых в абактериальном отделяемом обнаружены такие

клетки.

3. При хроническом уретрите и рецидивах типичные

трихомонады появляются у больных, у которых в острой

стадии обнаруживаются только эти клетки.

4. Они отсутствуют у больных с другими формами уретритов,

если нет смешанной инфекции.

5. Типичные трихомонады обнаруживают у большинства половых

партнерш лиц, которым диагноз трихомоноза был установлен

на основании обнаружения этих клеток.

6. При посеве материала от больных, у которых выявлены

такие клетки, нередко вырастают типичные трихомонады.

Представляет интерес то обстоятельство, что типичные подвижные

трихомонады чаще выявляют при хроническом и торпидном уретрите, нередко

осложненном хроническим простатитом, тогда как при острых уретритах

обнаруживают мало паразитов - в основном атипичные амебоидные

формы[7,10,14,15,19].

1.4.2 Культуральное исследование

Служит важным звеном лабораторной диагностики трихомоноза у мужчин и

женщин, особенно при распознавании атипичных форм паразитов и выявлении их

у лиц, получавших противотрихомонадные препараты при

трихомонадоносительстве. Разумеется, посевы необходимо проводить

параллельно микроскопии нативных и окрашенных препаратов и повторять при

отрицательных результатах.

Разноречивая оценка культурального метода диагностики трихомоноза

связана, в первую очередь, с использованием нестандартных питательных сред,

нередко обладающих низкими качествами. Достаточной чувствительностью

обладает среда СКДС, разработанная В. Н. Бедновой. Среди импортных высоким

качеством обладают также среды «Diamon», «Kupferberg», «Asani», а также

тест – система «Трихомоно-Скрин» Дмитриева .

Метод выращивания трихомонад в бульонной культуре - "золотой стандарт"

для диагностики, потому что это простой в интерпретации метод и требует

менее чем 300-500 трихомонад/мл инокулюма для начала роста в культуре. Тем

не менее, для него существуют ограничения, присущие культуральным методам.

Для диагностики необходим инкубационный период от 5 до 7 дней, являющийся

слишком длительным из-за возможности инфицированного пациента к

распространению инфекцию. В связи с этим он не получил широкого применения

в клинической практике в качестве прямого диагностического метода.

Для улучшения восприятия культурального метода, за рубежом был

разработан метод пластикового конверта, с помощью которого можно выполнить

как немедленную проверку присутствия трихомонады, так и сохранить

дальнейший рост трихомонад в одной самоподдерживающейся системе. Полученные

результаты сравнимы с таковыми при исследовании мазка и культур. Аналогично

пластиковому конверту используется система «InPouch» в виде двухкамерного

мешка, позволяющая выполнить быструю проверку культуры путём микроскопии

через стенку мешка.

Технология роста патогена на клеточной культуре использует свойства

клеточных линий восстанавливать рост T.vaginalis из клинических образцов.

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6