желток, размешанный в 200 мл изотонического раствора хлорида
натрия) вливают в 300 мл расплавленного и охлажденного до 50°С
мясопептонного и разливают в стерильные чашки Петри.
- молочно-желточно-солевой агар. В 1 л дистиллированной воды
растворяют при нагревании сухой питательный агар в количестве,
указанном на этикетке банки, и 90 г хлорида натрия; разливают в
колбы, стерилизуют при 120°С 20 мин. Перед употреблением в
расплавленный и остуженный до 50°С агар добавляют 60мл стерильного
молока, один желток (тщательно разбитый стеклянными бусами с 50 мл
изотонического раствора хлорида натрия), полимиксин М 300 000 ЕД.
Среду перемешивают и разливают в чашки: по 20-25 мл для
использование при подращивании стафилококков на мебрананных
фильтрах и по 12-15 мл (тонким слоем) для прямого посева.
3. Для обнаружение бактерий группы кишечных палочек:
- используется глюкозопептонную воду (ГПС), среда Эйкмана.
Концентрированная среда: в 1 л воды растворяют 100 г пептона, 50 г
хлорида натрия, 50 г глюкоза, нагревают смесь до кипения,
фильтруют, устанавливают рН 7,4-7,6, разливают по 10 мл в колбы
(емкостью по 100-250 мл) с поплавками и по 1 мл в пробирки с
поплавками. В среду можно добавить индикатор Аедреде (кислый
фуксин, обесцвеченный щелочью) или бромтимоловый синий.
Разведенную среду глюкозопептонной воды готовят так же, как
концентрированную, но количество ингредиенов в 10 раз меньше на 1
л воды. Лактозо-пептонную среду готовят так же как ГПС, с заменой
глюкозы на лактозу. Среды стерилизуют при 112°С 12 мин.
- среду Эндо. Среду готовят из сухого порошка по прописи, указанной
на этикетке банки. Состав порошка: сухой мясо-пептонный агар,
лактоза, основной фуксин, сульфит натрия. Среду готовят в день ее
использования. Горячую среду различают в стерильные чашки Петри и
оставляют до застывания на поверхности стола. Хранить чашки со
средой можно не более 3 дней в темном месте или в холодильнике.
- среду Эндо с молоком ( по Г. П. Калине). Среду готовят из сухого
порошка, но воды берется меньше: к 90 мл среды добавляют 10 мл
стерильного молока, 0,2 мл 10% спиртового раствора основного
фуксина, 0,2 мл 5% спиртового раствора розоловой кислоты,
тщательно перемешают зоны просветления при выпадении в осадок
параказена.
- желточно-лактозный бульон с бриллиантовым зеленым. К 700 мл
дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 10 г лактозы, 200 мл
желчи, 13,3 мл 1% водного раствора бриллиантового зеленого и
доливают по 5 мл в пробирки с поплавками, стерилизуют при 112°С 12
мин.
- среду ФКП-1. Среду готовят так же, как желточнолактозный бульон,
но только лактозы берут 1 г и добовляют 1 г триптофана.
- среду Хейфеца. В 1 л воды растворяют при нагревании 10 г пептона,
5 г хлорида натрия, 5 г маннита. Устанавливают рН 7,4-7,6,
фильтруют и добавляют 10 мл 5% спиртового раствора розоловой
кислоты, 23 мл 0,1% влного раствора метиленового синего.
Стерилизуют при 100°С (текучим паром) 20 мин. Зазливают в
стерильные пробирки и скашивает со столбиком. Цвет среды
краснофиолетовый.
- среду Кесслера. К 1 л воды добавляют 10 г пептонна, 50 мл желчи,
кипятят 20-30 мин, добавляют 2,5 г лактозы, доводят объем до 1 л,
устанавливают рН 7,8-8,2 и добавляют 4 мл 1% водного раствора
генциального фиолетового. Среди разливают в пробирки с поплавками
и стерилизуют при 0,5 атм. 15 мин. Среда фиолетового цвета. Среда
применяется при исследовании почвы.
- лактозный бульон с борной кислотой
4. Для обнаружение энтерококков используется:
- щелочно-полимиксиновая среда. Приготавливают три раствора по
следущим рециптам
|Ингредиенты |Обычная |Удвоенная |
| |концентрация |концетрация |
|Раствор 1 |40 мл |70 мл |
|мясопептонный | | |
|бульон | | |
|хлорид натрия |0,5 г |1 г |
|глюкоза |1 г |1 г |
|дрожжевой экстракт |2 мл (0,2 г) |4 мл (0,4 г) |
|жидкий (или сухой) | | |
|Раствор 2 |25 мл |12,5 |
|вода | | |
|дистилли-рованная | | |
|карбонат натрия |0,53 г |1,1 г |
|Раствор 3 |0,25 г |0,5 |
|бикарбонат натрия | | |
| вода |25 мл |12,5 мл |
|полимиксин |20000 ЕД/мл |40000 ЕД/мл |
|1,6 % спиртовый |0,5 мл |1 мл |
|раствор | | |
|бромтимоло-вого | | |
|синего | | |
Раздельно стерилизуют растворы 1, 2 и 3 при 112°С 12 мин.
Растворы смешивается, устанавливают рН 10,0-10,2, добавляют
полимиксин, бромтимоловый синий, разливают по 10, 50 и 100 мл во
флаконаы (удвоенной концентрации).
- молочно-ингибиторная среда Калины. К 85 мл стерильного
питательного агара добавляют 15 мл стерильного молока, 1,25 мл
0,01% водного раствора кристаллического фиолетового. Перемешивают
и разливают по стерильным чашкам Петри.
- желчная среда, среда Турчинского. К 600 мл дистиллированной воды
добавляют 400 мл желчи, 35-40 г сухого питательного агара, по 5 г
фосфата калия однозамещенного си двузамещенного, 5 г натрий-
аммония фосфата. Расплавляют при нагревании, разливают по флакон
и стерилизуют при 120°С 20 мин. Перед употреблением в
расплавленный остуженный агар добавляют на каждые 100 мл среды
0,5 г глюкозы, 1 мл 1% водного раствора TTX, 0,6 мл 1% водного
раствора синего, 20000 ЕД полимиксина М, 1-2 мл 0,1% спиртового
раствора фурацилина. Разливают по 20 мл в чашки Петри (толстым
слоем).
- азидная среда Сланеца-Бкртли. В 1 л дистиллированной воды
растворяют ( при нагревании) 30-40 г скхого питательного агара, 4
г фосфата калия однозамещенного, устанавливают рН 7,0;
стерилизуют при 120°С 20 мин. Перед употреблением в расплавленный
и слегка остуженный агар на каждые 100 мл среды добавляют: 2 мл
дрожжевого экстракта, 1 г глюкозы, 0,04 г азида натрия, 1 мл 1%
водного раствора TTX. Смешивают и быстро разливают в чашки Петри
по 2 мл.
5. Для обнаружение патогенных энтеробактерий спользуется:
- селенитовый бульон. Бульон готовят из сухой среды Луйфсона по
прописи на этикетке. При необходимости ее можно приготовить
следующим образом. Основной раствол: в 1 л воды растворяют 7 г
фосфата натрия двуузамещенного безводного, 3 г фосфата натрия
однозамещенного, 5 г пептона и 4 г лактозы. Устанавливают рН не
выше 7,0. Стерилизуют при 112°С 30 мин. Перед началом работы 2 мл
10 % раствора стерильного кислого селенистокислого натрия.
Готовую среду разливают в стерильные пробирки по 5-7 мл.
- тетратионатный бульон Мюллера. К 90 мл стерильного мясопептонного
бульона добавляют 4,5 г стерильного мела, 2 мл раствора Люголя,
10 мл гипосульфата натрия. ( При приготовлении раствора Люголя к
20 мл дистиллированной воды добавить йодида калия 20 г, йода 25
г, а за тем долить до 100 мл воды). Среда предназначена для
накопления в материале сальмонелл.
- тетратионатная среда с бриллиантовым зеленым (среда Кауфмана). К
500 мл тетратионатной среды добавляют 25мл стерильрой жклчи и 5
мл 0,1%раствора бриллиантого зеленого. Среда служит для
накопления сальмонелл.
- трехсахарный агар с мочевиной по Олькеницкому. Среда является
дифференциально-диагностической. К 100 мл дистиллированной воды
добавляют 2,5 г сухого питательного агара, 1 г лактозы, 1 г
сахарозы, 0,1 г глюкозы, 1 г мочевины, 0,02 соли Мола, 0,03 г
тиосульфата натрия, 0,4 мл 0,4% водного раствора фенолового
красного. Все тщательно перемешивают, устанавливают рН 7,2-7,4,
разливают по пробиркам, стерилизуют текучим паром по 20 мин 3 дня
подряд. Среду скашивают, оставляя столбик высотой 5 см. Среда
после стерилизации бледно-розового цвета.
- среда Ресселя. К 100 мл 1,5 %мясопептонного агара добавляют 1
%лактозы, 0,1% глюкозы и 1 мл индикатора Андреде (кислый фуксин,
обесцвеченный едким натром) или смесь водного голубого и
розоловой кислоты. Устанавливают рН 7,2. Среду разливают в
пробирки, стерилизуют при 112°С 20 мин и скашивают, оставляя
столбик агара высотой 2-3 см.
6. Для обнаружение иерсиний используется
- буферная среда обогащения. Предварительно готовят растворы солей:
3 мл 1/15 М гидрофосфата натрия в 100 мл дистиллированной воды и
7 мл 1/15 М дигидрофосфата натрия, также в 100 мл. Затем
добавляют 8,5 г хлорида натрия, доводят общий объем воды до 1 л,
фильтруют, устанавливают рН 7,2, разливают в пробирки по 5-6 мл и
стерилизуют текучим паром 30 мин.
7. Среды для контроля стерильности:
- сахарный бульон Хоттингера. К мясному перевару Хоттингера (140-
160 мг % амминного азота) добавляют 0,5% хлорида натрия,
подщелачивают до рН 8-8,2 ( с помощью 10 % раствора едкого
натра), кипятят 10 мин и фильтруют через ватный фильтр. Затем в
среду вносят 1 % глюкозы, устанавливают рН 7,3-7,5, (с помощью 5
% хлористоводородной кислоты), фильтруют через бумажный фильтр и
разливают в стерильные колбы или пробирки. Стерилизация при 120°
С 30 мин.
- бульон Сабуро. В 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г
пептона, кипятят 10 мин и фильтруют через бумажный фильт. Затем
добавляют 4% глюкозы (или мальтозы), устанавливают рН 5,7
разливают в стерильные колбы и пробирки. стерилизация при 112° С
30 мин.
- тиогликолевая среда. К 1 л дистиллированной воды добавляют 15 г
гидролизата казеина, 5 г дрожжевого экстракта, 2,5 г хлорида
натрия, 0,75 г цистина, 0,75 г агар-агара. Цистина предварительно
растворяют в небольшом количества воды (с помощью едкого натра).
Устанавливают рН смеси всех компонентов до 8-8,2, кипятят 5-10
мин до полного расплавления агара. Затем добавляют 5 г глюкозы и
0,3 мл тиогликолевой кислоты. Среду фильтруют, устанавливают рН
7,2-7,3 вносят 1 мл раствора резазурина натрия 1:1000,
перемешивают и разливают в стерильные пробирки. стерилизация при
120° С 20 мин.
Список литературы:
Актуальные вопросы эпидемиологии и инфекционных болезней. / Н. А.
Семина. – М.: Медицина, 1999
Внутрибольничная инфекция. / Шерертц, Хэмптон, Ристуцина. – Под ред. Р.
П. Венцела. – М.: Медицина 1990.
Внутрибольничная инфекция. / соавторами. – учебно-методическая пособия,
Иркутск, 1999. – 32 с.
Дезинфекционное дело. / Гандельсман Берта Израиловна. – Под ред. И. И.
Карон. – М.: Медицина, 1971
Медицинская микробиология / Под ред. акад. РАМН В.И. Покровского. – М.:
ГЭОТАР-МЕД, 2001. – стр.543-547
Медицинская микробиология. / Гл. ред. В.И. Покровсктй, О. К. Поздеев –
М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА, 1998. – стр. 631-656
"Медицинская энциклопедия" РАМН 2001 Russ Portal Company Ltd.
Санитарная микробиология и вирусология./ З. Н. Качемасова, С. А.
Ефремова, А. М. Рыбакова – М.: Медицина, 1987. – 352 с.
"Справочник госпитального эпидемиолога". М.: Хризгостом, 1999
Эпидемиология внутрибольничной инфекций. / Р. Х. Яфаев, Л. П. Зуева. –
Ленинград: Медицина, 1989
Эпидемиологические особенности внутрибольничных инфекции в районах
Сибири и Крайнего севера. / Ратушняк С. С. – автореферат, Иркутск, 1999
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5
