| | |Brucella),Респираторная |
| | |инфекция (B. Pertussis, |
| | |Legionella, N.meningitidis, |
| | |S.Pneumoniae, Staphylococcus, |
| | |Streptococcus), Listeria |
| | |monocytogenes, T.gondii |
|Торможение прямой |Антитела |Вирусы ЕСНО-коксаки, гриппа, |
|гемагглютинации | |парагриппа, паротита, кори, |
| | |реовирусы |
|Нейтрализация |Антитела |М.Pneumoniae, Вирусы |
| | |ЕСНО-коксаки, аденовирусы, |
| | |гриппа, парагриппа, |
| | |полимиелита, реовирусы |
|Перциптация |Антигены, |Гистоплазмоз, кокцидиоидомикоз,|
| |антитела |бластомикоз, аспергиллез. |
| | |кандидоз, сифилис |
|Коааглютинация |Антигены |Кишечные инфекции (Shigella, |
| | |энтеротоксикогенные E. Coli), |
| | |менингит (N.meningitidis, |
| | |S.Pneumoniae, H. Influenzae) |
|Латексагглютинация |Антигены, |менингит (N.meningitidis, |
| |антитела |S.Pneumoniae, Streptococcus, |
| | |H.Influenzae ), E. Coli, |
| | |S.aureus, Cl. Perfingens, |
| | |эхинококкоз, мононуклеоз, |
| | |краснуха, криптококкоз, |
| | |цитомегаловирус. |
|РПГА |Антитела |Yersinia, Staphylococcus, |
| | |мононуклеоз, краснуха, |
| | |трипаносомоз, шистомоз, |
| | |лейшманиоз, эхинококкоз, |
| | |амебная дизентерия |
|Реакция связывания |Антитела |Большинство патогенных вирусов,|
|комплемента | |бактерий, Chlamidia, |
| | |М.Pneumoniae, рикетсии, |
| | |Р.Capsulatum, B.dermatitidis, |
| | |C.immitis, Aspergillus |
|Иммунфлуоресценция |Антигены, |Aденовирусы, Вирусы |
| |антитела |ЕСНО-коксаки, цитомегаловирус, |
| | |вирус простого герпеса, гриппа,|
| | |краснухи, гепатита В, |
| | |М.Pneumoniae, Большинство |
| | |патогенных бактерий, |
| | |E.Histolytica |
|Иммуноферментный |Антигены, |Большинство патогенных |
|анализ |антитела |бактерий, вирусов, грибы, |
| | |простейшие |
|Генные зонды |Нуклеиновые |М.Pneumoniae, L.Pneumoniae, |
| |кислоты |Aденовирусы, Вирусы |
| | |ЕСНО-коксаки, гепатита A и В, |
| | |вирус простого герпеса, ВИЧ-1, |
| | |ВИЧ-2, папиломавирус |
антител (кишечные инфекции), хотя значение этих реакций в сравнении с
другими более чувствительными, постепенно снижается. Такая же
закономерность наблюдается и при использовании методов прямой агглютинации
при паразитарных заболеваниях.
Для вирусных инфекций аналогом является метод прямой гемагглютинации.
Однако, из-за его относительно невысокой специфичности, практически более
важным является метод ингибирования (торможения) реакции гемагглютинации с
целью определения антител к вирусу. Для этих же целей используют метод
нейтрализации вирусов, однако он более трудоемок из-за необходимости
поддержания культуры вируса.
На смену этим реакциям при бактериальных, вирусных и паразитарных
инфекциях приходят методы коагглютинации (определение антигенов) и
латексагглютинации (определение антигенов, либо антител). Эти методы
находят все большее практическое применение, особенно при диагностике
менингитов, респираторных и некоторых кишечных инфекций. Реакция пассивной
агглютинации по-прежнему популярна при диагностике паразитарных
заболеваний, реже при определении антител к вирусам (краснуха,
мононуклеоз).
Реакция связывания комплемента используется для определения антител
при большинстве видов инфекций, а особенно широко - при вирусных
заболеваниях и болезнях, вызываемых риккетсиями, микоплазмами и т. п.
Однако в последнее десятилетие этот метод вытесняется ИФА.
Иммунофлюоресцентный метод для определения антигенов и антител в силу
своей универсальности также распространен при различных видах инфекционной
патологии. В обычных вариантах он основан на микроскопии и визуальном
наблюдении. Это одновременно и недостаток (субъективная оценка) и
достоинство (наглядность), что в значительной мере руководит при его выборе
врачом, в зависимости от целей анализа. Модификации последних лет,
основанные на инструментальном учете, вместе с ИФА теснят другие
иммунохимические методы.
Радиоиммунологический анализ для диагностики инфекций применяется для
подтверждения некоторых форм гепатита В, а также СПИДа. Расширение области
его использования в практике диагностики инфекционной патологии мало
вероятно.
Иммуноферментный анализ для определения антигенов и антител к
микроорганизмам находит все более широкое применение в практике. В
настоящее время по частоте применения он не уступает, а в многих случаях
(гепатиты, СПИД) превосходит другие методы иммунохимического анализа. При
бактериальных, вирусных, паразитарных заболеваниях с его помощью определяют
различные антигены микробов и антитела к ним, относящиеся к разным классам
иммуноглобулинов.
Практически важным при выявлении антигена любым методом иммунохимического
анализа является представление о природе искомого антигена. В некоторых
случаях система анализа ориентирована лишь на определенный тип антигена,
характерный для определенного типа инфекции. Например, при диагностике
коклюша можно определять различные компоненты бактерии - ЛПС, различные
белки и т. д. Однако наиболее существенно выявление коклюшного токсина.
Вирусы, вызывающие у человека СПИД (ВИЧ-1 и ВИЧ-2) имеют общие антигены с
вирусами лейкоза крупного рогатого скота, но диагностически значимо
определять специфические гликоп- ротеины gp 24, gp 120 и т. д. То же
относится и к определению антител. При бактериальном эндокардите,
вызываемом S.aureus диагностически более значимы антитела к тейхоевым
кислотам, а при респираторной стафилококковой инфекции - антитела к
поверхностным антигенам. При использовании того или иного набора для
проведения иммунологического анализа следует определять для какого типа
заболевания определяемый признак является информативным, т. е.
увеличивающим вероятность точного диагноза.
Следовательно, в результате рассмотрения всего многообразия методов
иммунохимической диагностики, можно заключить, что необходимым является
использование различных методов, оптимальный набор которых зависит от
конкретной патологии. Так для острой респираторной инфекции кроме
классических бактериологического и вирусологического анализа можно
рекомендовать метод латексагглютинации для определения антигенов,
иммунофлуоресцентный метод для подтверждения, иммуноферментный для
определения антител. При СПИДе проводится определение вируса и антител к
нему иммуноферментным методом (иногда скрининг - методом латексаг-
глютинации) с подтверждением иммуноферментным (вестерн-блат), либо
радиоиммунологическим методом.
Цели непосредственного анализа диктуют наиболее приемлемые варианты
обследования и уровень сложности методов. Для массового скрининга
необходимы простые, но надежные и чувствительные методы
(латексагглютинация, гомогенный ИФА, иногда РПГА), позволяющие проводить
десятки и сотни анализов в сутки. Для установления первичного диагноза в
поликлиническом лечебном заведении, для анализа образцов в лаборатории СЭС
необходимы относительно простые методы, но с более высокими показателями
чувствительности (ИФА, РИА). При обследовании пациента в специализированной
клинике комплекс таких методов должен быть как можно более широким, включая
и длительные наблюдения динамики развития процесса, иммуногистологический
анализ (в том числе - иммунофлуоресцентный), генное зондирование и т. д.
Последовательное применение изложенных принципов, на наш взгляд, позволит
наиболее эффективно использовать преимущества высокочувствительных и
информативных методов иммунохимического анализа для диагностики
инфекционных заболеваний человека.
Список литературы:
1. Ройт А. “Основы иммунологии” Мир 1990 г.
1. Руководство “Иммунология инфекционного процесса” Москва 1994 г.
1. В.Г. Галактинов “Графические модели в иммунологии” Медицина 1986 г.
1. Р.В. Петров “Иммунология” Медицина 1987 г.
1. А.М. Егоров “Теория и практика иммуноферментного анализа” Высшая школа
1991 г.
1. У.П. Коллинз “Новые методы иммуноанализа” Мир 1991 г.
1. Каталог фирмы Biorad 1996 г.
1. Материалы занятий и лекции по микробиологии 1995 - 1996 год.
-----------------------
Гель с исследуемым образцом после электрофореза
5-бромо-4-хлоро-3-индол фосфат (BCIP),
нитросиний тетразоль (NBT)
Хемилюминесцентное определение
Усиление
окраски
4хлоро-1-нафтол, 3,3’-диамино- бензидин (DAB)
Усиление окраски
Коньюгаты биотина, стрептовидин
Коньюгаты щелочной фосфатазы
Коньюгаты золота
Коньюгаты пероксидазы хрена
Инкубация с реагентом
Инкубация со специфическими антителами
Блок неспецифических мест связывания
Амидо черный или кумаси синий (R-250)
4- хлоро - 1 -нафтол (4CN)
Красители из коллоидного золота
Биотиновые плашки для блоттинга
Аннионые красители
Определение антигена
Определение белков
Перенос разделенных белков на мембрану
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7
