Владивостокский Государственный Медицинский Университет
Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии
Р е ф е р а т
Холера
Выполнил: Новак А.Л.
301 гр. л/ф
Владивосток, 1998.
Этиология
Возбудитель холеры относится к роду Vibrio. Это изогнутая,
грамотрицательная, не образующая споры палочка, имеющая один полярно
расположенный жгутик. По чувствительности к специфическому фагу (IV тип по
Мукерджи) различают два биотипа холерного вибриона — классический
(возбудитель азиатской холеры) и Эль-Тор. Каждый из них по 0-антигену
подразделяется на 3 серологических типа: Огава (АВ), Инаба (АС) и редко
встречающийся Гикошима (АВС), который некоторые авторы рассматривают как
вариант серотипа Огава. Н-антиген холерных вибрионов — общий для всех
серотипов.
Холерные вибрионы образуют термолабильный экзотоксин — холероген
(относительная молекулярная масса — 82—84 кд). Он состоит из комплекса
тяжелой субъединицы А, активирующей аденилатциклазу, и субъединицы В,
представленной 4—6 легкими цепями и обеспечивающей связывание холеро-гена с
рецепторами эпителиальных клеток тонкой кишки.
Биолого-патогенетические свойства возбудителя
Миновав желудочный барьер, вибрионы попадают в тонкую кишку с
благоприятной для них средой и заселяют (колонизируют) поверхность
кишечного эпителия. Процесс колонизации включает в себя хемотаксис
вибрионов к слою слизи, покрывающему верхушки ворсинок тонкой кишки,
проникновение через эту слизь, адгезию к рецепторам на исчерченной каемке
кишечных эпителиоцитов и размножение на поверхности эпителия ворсинок и
крипт. У больных холерой возбудитель может быть обнаружен на всем
протяжении желудочно-кишечного тракта. В желудке при рН не менее 5,5
вибрионы не обнаруживаются, в стуле их концентрация достигает 106—107
(иногда ^—Ю9).
Размножившись до определенной концентрации, возбудитель вызывает
заболевание посредством вырабатываемого им холерогена. Основную роль в
развитии болезни играют вибрионы, которые находятся в тесной связи со
слизистой оболочкой тонкой кишки, так как они выделяют холероген в
непосредственной близости от его рецепторов на эпителиальных клетках — ган-
глиозида GM1. После прикрепления холерного токсина к ганглиозиду
субъединица А проходит через мембраны внутрь эпителиальной клетки, где
происходит высвобождение фрагмента А1. Последний энзиматически расщепляет
НАД и передает его АДФ-рибозную половину на регуляторный протеин
аденилатциклазного комплекса, находящегося на внутренней стороне мембраны
эпителиоцита. В результате происходит активация аденилатциклазы, приводящая
к повышению содержания цАМФ — одного из внутриклеточных стимуляторов
кишечной секреции. Связывание холерного токсина с рецепторами на
эпителиальных клетках происходит чрезвычайно быстро (через 1—3 мин);
биохимические нзменения в клетке являются необратимыми.
Возникающее заболевание сопровождается потерей огромных количеств
жидкости с низким содержанием белка и высокой концентрацией ионов натрия,
калия, хлоридов, гидрокарбонатов. Эта жидкость по составу отличается как от
экссудата, так и от транссудата и ближе к составу кишечного секрета.
Восприимчивость
К холерному вибриону восприимчивы люди всех возрастов. Чаще и тяжелее
болеют холерой лица, злоупотребляющие алкоголем или перенесшие резекцию
желудка. Кислотность желудочного сока играет важную роль в определении
минимальной инфицирующей дозы — в опытах на добровольцах при нейтрализации
желудочного сока гидрокарбонатом натрия количество вибрионов, необходимых
для воспроизведения специфического процесса у человека, уменьшается с 10"
до 104—10Ь микробных клеток.
Клинические особенности
Инкубационный период при холере длится от 1 до 5 дней. Клинические
проявления холеры весьма варьируют, и тяжесть клинического течения
определяется степенью обезвоживания. Заболевание начинается обычно
внезапно. Первым клинически выраженным признаком холеры является понос.
Типичные холерные испражнения представляют собой водянистую, мутновато-
беловатую жидкость с плавающими хлопьями, напоминают по внешнему виду
рисовый отвар и не имеют запаха. Мышечная слабость и судороги в икроножных
мышцах — ранние симптомы холеры. Вслед за жидким стулом появляется обильная
повторная рвота, быстро приводящая к декомпенсированному эксикозу. Кожные
покровы становятся цианотичными, холодными на ощупь, черты лица
заостряются, глаза и щеки западают. Кожа кистей рук морщинистая («руки
прачки»), голос сиплый, вплоть до афонии. У больных с тяжелой формой холеры
отмечается гипо-термия. Из-за ее постоянства терминальная форма холеры (IV
степень дегидратации) получила название «алгидная». Алгид
(декомпенсированное обезвоживание) сопровождается нарушением деятельности
основных систем организма — сердечно-сосудистой, дыхательной,
мочевыделительной.
Иммунологическая диагностика
Обнаружение антигена. Возбудитель холеры и его специфические антигены
(корпускулярный, растворимый, холероген) выявляют в фекалиях, рвотных
массах, крови, дуоденальном и кишечном содержимом, желчном пузыре, в
объектах окружающей среды (смывы с различных предметов), в воде открытых
водоемов, сточных водах, гидробионтах и др.
Из современных методов индикации антигенов холерного вибриона наибольшее
распространение получила РНГА, чувствительность которой с антительными
эритроцитарными диагностикумами составляет 105—101' бактерий в 1 мл или
0,04 мкг/мл 0-антигена. При клинически выраженных формах холеры, когда в
испражнениях больных содержится огромное количество вибрионов (10'—109 в 1
мл), прямое исследование фильтратов прогретых на водяной бане испражнений в
РНГА с антительным диагностикумом позволяет дать ответ о наличии
специфического антигена уже через 2-—3 ч. Рвотные массы больных,
испражнения вибриононосителей и контактных лиц, содержащие меньшее
количество вибрионов, целесообразно исследовать после предварительного 6-
часового подращивания на 1% пептонной воде. При исследовании испражнений и
рвотных масс оказалось, что лишь в 52% случаев диагноз холеры был
подтвержден бактериологически у больных, в анамнезе значительной части
которых имелось указание на употребление антибиотиков при появлении первых
признаков заболевания. С помощью РНГА заболевания холерой удалось
дополнительно установить еще у 21 % больных [Поляков И. И. и др., 1973].
При исследовании испражнений, содержимого кишечника и желчного пузыря
умерших от острых кишечных заболеваний, испражнений здоровых лиц и проб
воды обычно в практических условиях наблюдали полное совпадение результатов
серологического и бактериологического методов исследования, что позволяет
считать РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом достаточно
надежным экспресс-методом при массовом обследовании на холеру.
Некоторыми авторами при индикации специфических антигенов холерного
вибриона отдается предпочтение РТНГА. Холерные диагностикумы для этой
реакции готовят из бараньих или человеческих О (I) группы эритроцитов,
сенсибилизированных холерными 0-антигенами. Чувствительность метода —
104—106 бактерий в 1 мл при исследовании нативных испражнений и 10'—105 —
после предварительного подращивания. Минимальное количество 0-антигена,
выявляемого с помощью РТНГА, равно 0,04—0,16мкг/мл. РТНГА дает
положительные результаты у 91% больных холерой, у 40% ре-конвалесцентов и
12% контактировавших с больными, 0-антиген холерного вибриона может быть
определен через 1 мес от начала заболевания в фекалиях у всех переболевших
людей, а спустя 5—6 мес — у половины обследованных, что, по-видимому,
свидетельствует о более длительной экскреции специфического антигена в
нежизнеспособной форме. Совпадение результатов бактериологического метода и
РТНГА, по различным данным, наблюдается в 63—100% случаев. Имеющиеся
материалы дают основание считать целесообразным широкое испытание РТНГА.
Положительную оценку при диагностике холеры получил МФА, позволяющий
выявлять холерные вибрионы при содержании их не менее 10° в 1 мл.
Использовать МФА целесообразно при исследовании нативного материала от
больных и трупов. У больных холерой положительные результаты с помощью МФА
были получены в течение 2 ч в 70—90% наблюдений при полном совпадении с
результатами бактериологического анализа. Применение МФА при исследовании
воды и смывов возможно лишь после предварительного подращивания или
концентрирования материала. Представляется перспективным использование
иммунотушевой окраски холерных вибрионов.
Для выявления антигенов холерного вибриона применяют агрегат гемаг-
глютинационную пробу (АГГ). В основе её лежит использование для агрегации и
фиксирования белков иммунной сыворотки на эритроцитах химического вещества
из группы диазосоединений в виде препарата диазоль черного С. Эритроциты,
сенсибилизированные агрегированными белками холерной 0-сыворотки, обладают
высокой специфичностью и чувствительностью. С их помощью удается определить
0,01—0,005 мкг/мл «цельного» растворенного антигена, приготовленного по
Страницы: 1, 2
