| |
|ХЛАМИДИОЗ - СОВРЕМЕННЫЕ ПОДХОДЫ К ДИАГНОСТИКЕ И ЛЕЧЕНИЮ |
|Цитоскопические методы обнаружения хламидий |
|При цитоскопическом методе одновременно с поиском |
|цитоплазматических клеток-включений Провачека учитывается |
|количество лейкоцитов как показателя воспаления, а также |
|дополнительная информация о наличии сопутствующей |
|бактериальной микрофлоры, дрожжеподобных грибов, трихомонад|
|и т.п. |
|Показания: Острая фаза заболевания. |
|Материалом для исследования служат соскобы из уретры у |
|мужчин и уретры и /или цервикального канала у женщин. |
|Материал берут специальными щеточками или ложечками |
|Фолькмана. Выделения из цервикального канала удаляются |
|ватным тампоном. Щеточка вводится в канал на 1-2 см, |
|вращается 15 секунд . Соскобный материал распределяется на |
|предметном стекле, высушивается на воздухе и фиксируется в |
|метаноле или холодном ацетоне. Наиболее популярна окраска |
|по Романовскому-Гимзе. После окраски препараты |
|просматриваются в световом микроскопе, используя |
|иммерсионный объектив (х90). При этом цитоплазма клеток |
|окрашивается в голубой цвет, ядра в фиолетово-синий, |
|цитоплазматические включения определяются в виде |
|темно-синих или розовых микроколоний на фоне голубой |
|цитоплазмы. На стадии элементарных включения хламидий |
|окрашиваются в розовый цвет, на стадии элементарных телец |
|-в синий. |
|Цитоскопический метод широко доступен, но эффективен лишь |
|при острых формах инфекции, значительно менее эффективен и |
|информативен при хронических формах заболевания При |
|урогенитальном хламидиозе частота обнаружения телец |
|Провачека в соскобах уретры и цервикального канала не |
|превышает 10-12 %. Наличие этих телец подтверждает диагноз |
|хламидиоза, однако их отсутствие не исключает наличие |
|инфекции. |
|Прямая иммунофлюоресценция (ПИФ) |
|Этот метод предусматривает прямое выявление антигенов |
|хламидий. При люминесцентной микроскопии включения хламидий|
|определяются в виде зеленой или желто-зеленой флюоресценции|
|включений на коричнево-оранжевом фоне цитоплазмы клеток |
|Включения могут иметь зернистую гомогенную или смешанную |
|структуру. |
|Показаниями для диагностики хламидийной инфекции этим |
|методом являются: |
|1.Острая фаза заболевания. |
|2.Хроническая фаза заболевания |
|3 Установление этиологии хронического инфекционного |
|процесса урогенитального тракта |
|4. Беременность с отягощенным акушерским анамнезом |
|5. Бесплодие неясного генеза. |
|Диагностическая информативность ПИФ связана с тем, что с ее|
|помощью выявляются не только корпускулярные, но и |
|растворимые антигены хламидий Этот метод не зависит от |
|возможного изменения тинкториальных свойств микроорганизма |
|в процессе заболевания и лечения. ПИФ-метод является |
|важнейшим скриннинговым методом диагностики урогенитального|
|хламидиоза. Его чувствительность и специфичность при |
|использовании моноклональных антител составляет |
|соответственно 65-90% и 85-90%. При оценке результатов |
|следует учитывать, что только показатели внутриклеточной |
|флюоресценции могут оцениваться в качестве положительного |
|результата этого теста при использовании поликлональных |
|антихламидийных антител, при использовании моноклональных -|
|результат считают при наличии 10 ЭТ в поле зрения. |
|Соскобные препараты готовят также, как и для |
|цитоскопических исследований. |
|Выпускают диагностические наборы, содержащие моноклональные|
|антитела для ПИФ, следующие фирмы: Syva, Drfco, Kallastad, |
|Bartrels, Boots celltech, California Integrated |
|Diagnostics, Orion Diagnostica. Реагенты фирм Syva, Difco, |
|Kallastad представляют собой меченные ФИТЦ моноклональные |
|антитела к основному белку наружной мембраны хламидий, а |
|реагенты других фирм - моноклональные антитела к |
|родоспецифическому хламидийному липолисахариду (ЛПС). В |
|России ЗАО “НИАРМЕДИК плюс” при НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН|
|выпускает моноклональные антитела к ЛПС хламидий, которые |
|успешно конкурируют с продукцией иностранных фирм по |
|качеству продукции. Это набор “Хламоноскрин” для |
|определения моноклональных антител к родоспецифическому |
|липополисахаридному антигену и набор “Хламоноскрин-2” для |
|определения моноклональных антител к видоспецифическому |
|белковому антигену хламидий трахоматис. Наборы имеют ФС |
|42-359598 и регистрационное удостоверение Минздрава России |
|93/ 270/ 9 . |
|Моноклональные антитела отличаются друг от друга по |
|вызываемой яркости свечения, постоянству выявляемых форм ЭТ|
|и степени специфичности. Для диагностики хламидий этим |
|методом необходим люминесцентный микроскоп. |
|В целом, метод ПИФ отвечает критериям высокой |
|чувствительности и специфичности, но требует исполнения |
|опытным, компетентным лабораторным работником. |
|Высококвалифицированная экспертная оценка методом ПИФ редко|
|бывает доступной, поэтому средняя чувствительность его |
|снижается. Метод недостаточно чувствителен и для |
|стабильного определения малых количеств ЭТ. К тому же |
|невозможно проверить и отрицательные результаты, и, |
|следовательно, обнаружить среди них ложноотрицательные, что|
|приводит к снижению чувствительности. |
|Иммуноморфологические методы |
|Эти методы основаны на обнаружении антигенных субстанций |
|хламидий в эпителии и других тканях путем обработки |
|препаратов специфическими антителами. Антитела |
|диагностической антихламидийной сыворотки соединены с |
|какой-либо меткой - люминесцирующей (ФИТЦ-антитела) или |
|ферментной (энзим-меченые антитела). |
|Непрямой метод иммунофлюресценциии |
|Непрямой метод иммунофлюресценции применяют в тех случаях, |
|когда нет в наличии ФИТЦ-конъюгата антихламидийных антител.|
|В этих случаях приготовленный тем же методом, что и для ПИФ|
|препарат из клинических проб обрабатывают вначале |
|антихламидийными антителами, полученными путем иммунизации |
|хламидиями овец, кроликов, мышей или других животных, а |
|затем второй сывороткой, специфичной для вида животного, |
|которое было иммунизировано хламидиями. Антитела второй |
|сыворотки конъюгированы с ФИТЦ. Показания к применению и |
|специфичность данного метода совпадают с ПИФ. |
|Диагностика хламидий на культуре клеток МсСоу |
|Одним из лучших, но в то же время наиболее трудоемким |
|является метод диагностики хламидий путем изоляции |
|возбудителя на культуре клеток, обработанных различными |
|антиметаболитами (“золотой стандарт”) Для этой цели обычно |
|используют чувствительную культуру клеток, обработанную |
|циклогексимидом. Чувствительность культурального метода по |
|сравнению с ПЦР составляет 70-80%, но в то же время он |
|превосходит молекулярно-биологические методы диагностики по|
|специфичности. В литературе описаны случаи выявления |
|хламидий трахоматис методом ПЦР при отрицательных |
|результатах культурального теста и наоборот. |
|1 Беременность с отягощенным акушерским анамнезом. |
|2. Оценка эффективности проведенного антибактериального |
|лечения. |
|3. Выявление чувствительности и резистентности к |
|антибактериальным |
|препаратам. |
|4. Выявление хламидий у ВИЧ-инфицированных или лиц со |
|вторичными иммунодефицитными состояниями (онкологические |
|больные после проведенных курсов лучевой и химиотерапии, |
|трансплантации костного мозга; лица, получающие |
|иммунодепрессанты; больные вирусным гепатитом и |
|туберкулезом). |
|6. Установление этиологии хронического инфекционного |
|процесса урогенитального тракта. |
|Культуральный посев является референс-методом при оценке |
|эффективности антибактериального лечения. При исследовании |
|биопроб методом ПЦР после курса химиотерапии в некоторых |
|случаях можно получить “ложноположительные с клинической |
Страницы: 1, 2, 3
