Рефераты. Фармакогностическое изучение рода хвощ

электрической плитке и прокаливали в муфельной печи. Затем золу

обрабатывали 1% раствором хлороводородной кислоты, фильтровали, осадок на

фильтре промывали 1% раствором хлороводородной кислоты и растворяли в 5%

растворе гидроксида калия. С раствором силиката калия проводили реакцию с

10% подкисленным раствором молибдата аммония, приготовленного следующим

образом: к 90 мл 11% раствора молибдата аммония прибавляли 10 мл 50 %

раствора серной кислоты.

К 1 мл полученного раствора силиката калия прибавляли 2 мл 10%

подкисленного раствора молибдата аммония, должно образоваться желтое

окрашивание, при добавлении нескольких кристалликов аскорбиновой кислоты

желтая окраска должна переходить в интенсивно синий цвет.

8 Обнаружение эфирных масел.

Использовался метод перегонки водяным паром. Навеску измельченного

сырья помещают в широкогорлую круглодонную колбу вместимостью 700-800 мл,

приливают 300 мл воды и закрывают резиновой пробкой с обратным

холодильником. В пробке снизу укрепляются металлические крючки, на которые

при помощи тонкой проволоки подвешивают градуированный приемник так , чтобы

конец холодильника находился точно над воронкообразным расширением

приемника, не касаясь его. Колбу с содержимым нагревают до кипения и слабо

кипятят.

Пары воды и эфирного масла конденсируются в холодильнике и жидкость

стекает в приемник. Масло отстаивают в градуированном колене приемника, а

вода через меньшее колено приемника вытекает обратно в колбу.

9 Обнаружение сесквитерпеновых лактонов.

50 мл водного извлечения (1:10) помещали в делительную воронку,

добавляли 10 мл хлороформа и осторожно взбалтывали, затем хлороформное

извлечение сливали в колбу. К этому же водному извлечению добавляли свежую

порцию хлороформа, второе извлечение объединяли с первым. Затем хлороформ

отгоняли под тягой до получения «смолки».

ИК-спектр снимали на спектрофотометре «Specord UR» с призмами Li F и

NaCl в таблетках KBr высотой 1 мм при соотношении веществ, наполнителя

1:400 и в пленке.

6. Количественное определение флавоноидов

Около 1,0 г сырья помещали в колбу с притертой пробкой на 50 мл,

заливали 20 мл 90% этанола с содержанием 2%-тов концентрированной

хлороводородной кислоты, экстрагировали с обратным холодильником на кипящей

водяной бане и декантировали в мерную колбу на 50 мл. Извлечение повторяли

еще дважды, заливая по 10 мл 90% подкисленного этанола. Объединенное

извлечение доводят до метки 90% этанолом.

0,2 мл экстракта наносили на полоску хроматографической бумаги размером

45(15 см и хроматографировали в системе 0,1 М хлороводородной кислоты.

Хроматограмму высушивали, в УФ-свете отмечали пятна флавоноидов, вырезали и

элюировали 96% этанолом три раза по 10, 5 и 5 мл в колбе спритертой пробкой

с обратным холодильником на водяной бане. Полученное извлечение флавоноидов

сливали в мерную колбу на 25 мл, доводили до метки 96% этанолом и снимали

оптическую плотность элюятов с помощью спектрофотометра с толщиной слоя 1

см при длине волны 353нм.

Сумму флавоноидов пересчитывали на кверцетин (Е =387,5) поформуле:

C= Д*У1*К*У2*100/(Е *I*М*(100-В)*У3,где

Д- оптическая плотность

У1- объем первого извлечения, мл (50 мл)

У2- объем второго извлечения, мл (25мл)

У3- объем, пошедший на хроматографирование, мл (0,2 мл)

Е -удельный показатель поглощения

М- масса навески, г

В- влажность сырья, %

I- толщина слоя, см

К-поправочный коэффициент на неполное элюирование с бумаги (1,15)

7. Количественное определение соединений кремния

В предварительно прокаленный фарфоровый тигльпомещали около 1,0 г

сырья, сжигали и прокаливали в муфельной печи при температуре не выше 560-

650 (С до постоянной массы (3-5 часов).

После охлаждения золу количественно переносили в стакан емкостью 150

мл, добавляли 50 мл 5% раствора хлороводородной кислоты и нагревали на

кипящей водяной бане в течение 20 мин. Полученный раствор отфильтровывали

через рыхлый беззольный фильтр, осадок промывали 1% раствором

хлороводородной кислоты.

Фильтр с осадком переносили в коническую колбу на 150 мл, добавляли 50

мл 5% раствора гидроксида калия, затем прикрыв часовым стеклом, нагревали

до кипения и кмпятили в течение 20 мин (колбу перед нагреванием взвесили).

После охлаждения содержимое колбы доводили до первоначальной массы 5%

раствором гидроксида калия.

1 мл полученного фильтрата помещали в мерную колбу на 25 мл, прибавляли

2 мл 5% раствора серной кислоты, доводили водой до метки. Через 15 мин

определяли оптическую плотность с помощью фотоэлектроколориметра в кювете с

толщиной слоя 10 мм при длине волны 400 нм, используя в качестве раствора

сравнеия фильтрат без добавления реактивов.

8. Методика определения экстрактивных веществ.

20 г сырья измельчали и просеивали сквозь сито с отверстиями диаметром

1мм, помещали в коническую колбу прилив растворителя до «зеркала». Колбу

закрывали пробкой, взвешивали и оставляли на 16 часов. Затем содержимое

тщательно взбалтывали и фильтровали через сухой фильтр в сухую колбу.

Фильтрат переносили в фарфоровую чашку диаметром 7-9 см, предварительно

высушенную при t( +100(C до постоянной массы и взвешенную на

аналитических весах. Фильтрат выпаривают на водяной бане досуха, и сушат

при t( 100-105(С в течении 3 часов, охлаждали в эксикаторе и взвешивали.

9. Определение микроэлементного состава.

Для определения минерального состава травы хвоща использовался рентгено-

флуоресцентный метод.

В чашку (тигль) берут навеску измельченного продукта (пробы взвешивают

с погрешностью не более + 0,01 г), помещают в сушильный шкаф и высушивают

при температуре около +105(С.

Содержимое чаши смачивают 2-3 мл 32% раствором азотной кислоты и

нагревают на водяной бане до прекращения выделения паров. Обработку азотной

кислотой повторяют еще дважды. Затем чашу помещают на электроплитку и

проводят обугливание до прекращения выделения дыма, потом чашу переносят в

электропечь при температуре около +250(С. Минерализацию проводят,

постепенно повышая температуру электропечи на +50(С через каждые 30 мин и,

доведя ее до температуры +450(С, продолжают минерализацию при этих условиях

до получения золы. Чашу с золой извлекают из электропечи, охлаждают до

комнатной температуры и смачивают золу 0,5-1,0 мл 32% раствором азотной

кислоты. Затем кислоту досуха выпаривают на электроплитке со слабым

нагревом и снова помещают чашу с пробой в электропечь при температуре,

постепенно доводя температуру до 450(С и выдерживают 1 час. Минерализацию

считают законченной, когда зола станет белого или слегка окрашенного цвета,

без обугленных частиц. При наличии обугленных частиц повторяют обработку

золы раствором азотной кислоты или водой.

В чашу с золой добавляют 10 мл 32% раствора азотной кислоты, нагревают

на электроплитке со слабым нагревом до появления запахов азота. Содержимое

чаши фильтруют в стакан через фильтр «белая лента». Тщательно ополаскивают

чашу водой очищенной, фильтруя смыв чаши в тот же стакан. В фильтрат,

содержащий тяжелые металлы добавляют азотнокислый цирконил, нагревают,

фильтруют. Полученный осадок анализируют на приборе спектрометре

«Спектроскан».

10. Исследование антигрибковой активности

С целью изучения антигрибковых свойств БАВ хвоща полевого воздушно-

сухое сырье измельчали до размера частиц 2-5 мм, заливали до «зеркала»

экстрагентом (вода очищенная, этиловый спирт 70%, бутанол, хлороформ, эфир)

настаивали в течении 16 часов, фильтровали и полученные экстракты

высушивали в струе воздуха, нагретого до +30(С.

Антигрибковые свойства полученных экстрактов исследовали методом

двукратных серийных разведений в жидкой среде Сабуро по методике Вичкановой

С.А.. Состав среды Сабуро:

- 10,0 пептона,

- 40,0 мальтозы,

- воды очищенной до 1 л.

В качестве тест-культуры использовали штаммы Aspergillus niger

163/3685, Candida albicans 4337, Trichophiton rubrum ВКПГ248/700, T.

Mentagrophytes var. Interdigitale ВКПГ 268, Microsporum canis ВКПГ 326/316,

которые были получены в отделе микологии центрального кожно-

венерологического института Министерства здравоохранения России г. Москва.

Подготовка грибов-дерматофитов к опыту, посев и их учет проводили по

методу Г.Н. Першина. Для посева использовали суспензии как правило,

суточной агаровой культуры дрожжей, культуры плесневого гриба 4-5 суточные,

остальных дерматофитов 7-10 суточные. Взвеси грибов готовили в

физиологическом растворе по оптическому стандарту мутности.

После дополнительных разведений стандартного раствора микробная

нагрузка патогенных грибов составляла 1000 грибковых тел в 1 мл среды.

Посевы инкубировали в термостате, дрожжи при 37(С, остальные при 33(С.

Учет культуры дрожжей проводили через 24 часа, другие культуры на 7-10

сутки. Предельная доза препарата испытанная нами, соответствовала 1000

мкг/мл. Повторность каждого опыта 4-6 кратная. Контролем служили пробирки с

питательной средой, засеянные аналогичным количество тест-культуры, а также

пробирки со средой и препараты без культуры (для проверки мутности и

осаждения препарата).

За критерий антигрибковой активности препарата принимали

фунгистатический титр, который оценивали в микрограммах на 1 мл (мкг/мл)

питательной среды. За фунгистатический титр принимали предельную

концентрацию препарата в среде, при которой отсутствовал видимый рост

Страницы: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8



2012 © Все права защищены
При использовании материалов активная ссылка на источник обязательна.