нераспознанным.
11. Биологическое направление, связанное с изучением токсических и
агрессивных свойств патогенных микроорганизмов. Биологические методы
осуществляются на одноклеточных организмах, на культурах клеток, куриных
эмбрионах, а также на здоровых, а еще лучше специально подготовленных
лабораторных животных. Эти методы более трудоемкие и менее точные по
сравнению с другими.
12. Физико-химическое направление. Это направление связано с
использованием сравнительно быстрых, но в то же время и достаточно сложных
по аппаратурному оформлению методов. Сюда входят методы изучения
бактериальных популяций и их экстрактов с помощью хроматографии
(газожидкостная и др.), спектроскопии (инфракрасной, ультрафиолетовой и
др.), резистографии в отношении различных антибиотических, химических и
лекарственных веществ, а также методы температурной и кислотной агрегации,
коагуляции микробных суспензий и их токсинов.
13. Рецепторное и генетическое направления быстрой индикации патогенных
и санитарно-показательных микроорганизмов. Методы, основанные на этих
принципах, только начинают развиваться. Так, с помощью целлюлозно-
глобулинового или эритроцитарно-глобулинового диагностикумов быстро
обнаруживают патогенный стафилококк, содержащий белок А, а путем гомологии
неизвестных нуклеиновых кислот с известными нуклеиновыми кислотами
устанавливают вид патогена.
14. Комплексное направление ускоренной идентификации патогенных и
санитарно-показательных микроорганизмов, использующее методы экспресс-
индикации, основанные на интеграции различных принципов, связано с
разработкой и созданием индикаторных тест-систем, позволяющих в течение
короткого срока и с минимальными затратами на анализ определить комплекс
основных признаков патогена или санитарно-показательного представителя,
достаточных для его идентификации до рода, вида и даже типа.
15. Направления, связанные с разработкой новых принципов
микробиологического анализа. Вполне вероятно, и мы вправе ожидать в
ближайшие 5—10 лет появления новых идей, подходов и принципов в
микробиологической науке и смежных с ней областях. Открытие новых видов
рецепторной, иммунологической и генетической специфичности у микробов
позволит создать новые и возможно более совершенные методы быстрой
идентификации микроорганизмов.
Основные пути развития экспресс-индикации микроорганизмов на ближайшие
годы:
1) создание и конструирование новых препаратов, способствующих
ускорению и удешевлению исследований, повышению эффективности лабораторной
диагностики инфекций и индикации патогенных и других микроорганизмов. На
этом пути предстоит сделать очень многое, поскольку общепринятые
диагностические препараты в значительной степени исчерпали свои
потенциальные возможности;
2) разработка новых более чувствительных, простых методов лабораторного
анализа.
3) разработка комплексных методов и видов исследований. Будет
продолжаться дальнейшая интеграция методов и видов исследований, имеющих
разные принципы действия, лежащие в их основе;
4) создание новых схем исследований. Поскольку лабораторная диагностика
инфекционных болезней, а также экспресс-индикация, хотя и в меньшей
степени, связаны с изучением комплекса различных свойств и особенностей
микроорганизмов с использованием обычно разнообразных методов и приемов,
основанных на различных принципах, то создание новых схем исследований с
применением новых методов является объективной реальностью и важной
задачей, вытекающей из существа самого процесса развития
микробиологического анализа;
5) разработка и создание новых методов регистрации и учета результатов
экспресс-индикационных и лабораторных исследований.
6) разработка новой микроминиатюрной лабораторной посуды, аппаратуры и
приборов для исследований;
7) автоматизация и компьютеризация исследований.
В современных условиях эти вопросы должны решаться комплексно.
Таким образом, рассмотренные основные направления и пути развития
экспресс-индикации микроорганизмов в период современного научно-
технического прогресса естественных наук безусловно получат дальнейшее
ускоренное развитие, а микробиологическая лабораторная практика обогатится
новыми быстрыми методами индикации микробов.
Экспресс-диагностика холеры
Холеру вызывают два биовара Vibrio cholerae. Один из них, выделенный
Кохом в Египте в 1883 году, назвали классическим, другой, полученный
Ф.Готшлихом на карантинной станции Эль-Тор в Северной Африке в 1906 году –
V.eltor. оба биовара неагглютинирующиеся вибрионы (НАГи), галофильные
парагемолитические вибрионы, продуцирующие гемолизин, и нехолерные вибрионы-
кислотообразователи включены в род Vibrio семейства Vibrionaceae.
Это острая кишечная инфекция, сопровождающаяся резким обезвоживанием и
обессоливанием организма. Источником инфекции является человек – больной
или носитель. Механизм передачи фекально-оральный.
Возбудители имеют соматический О- и жгутиковый Н-антигены. О-антиген
обладает видовой и типовой специфичностью. По строению О-антигена различают
долее 40 сероваров. Развивающийся к холере иммунитет носит гуморальный
характер.
Материал для исследования: испражнения, рвотные массы, трупный
материал.
Метод массового исследования на вибриононосительство. Материал берется
непосредственно из кишечника при помощи стеклянной трубочки диаметром 0,5
см (для детей), 1,5 см (для взрослых) и длиной 15 см с оплавленными концами
(при отсутствии трубочек используют ватные тампоны на деревянных палочках).
Трубочку немедленно погружают во флакон, содержащий 100 – 200 мл 1%
пептонной воды и агглютинирующую холерную О-сыворотку в разведении до
половины ее титра. В один и тот же флакон берут материал от 10 лиц. Флаконы
помещают в термостат при 370С. Через 3 – 4 часа холерные вибрионы начинают
агглютинироваться и постепенно (в течение ближайших 2 часов) падают в виде
хлопьев на дно флакона. Исследуя под микроскопом окрашенные мазки и
«висячую каплю», обнаруживают склеившихся и частично свободных вибрионов.
Через 6 часов дается ответ и в случае обнаружения холерных вибрионов
немедленно производится посев индивидуально от каждого из 10 лиц. Такой
метод дает возможность исследовать до 16 000 человек за 3 – 4 дня.
Метод иммунодиагностической микропленки. Изучение антигенных свойств
холерных вибрионов проводят путем постановки пробирочной или пластинчатой
реакции агглютинации с использованием сухих лиофилизированных
диагностических агглютинирующих холерных 0-сывороток и сывороток Огава и
Инаба. Сыворотку разводят в физиологическом растворе или дистиллированной
воде и смешивают при постановке агглютинации на стекле с исследуемой
культурой вибрионов. При подготовке сыворотки используется дополнительная
посуда, что усложняет работу бактериолога, а в оставшейся разведенной
сыворотке быстро прорастает бактериальная микрофлора и инактивирует ее.
Для изучения антигенной структуры холерных вибрионов были разработан
иммунодиагностический препарат в виде микропленок разового применения,
который обладал достаточной специфичностью, демонстративностью и
экономичностью. Иммунодиагностические холерные микропленки (ИХМП) в виде
полимерной пленки с нанесенными высушенными каплями, фиксированными на
бумаге, содержат минимальное количество сыворотки, пленкообразующий
компонент и консервант. Пленкообразующий компонент связывает, склеивает и
фиксирует микроколичества ингредиентов к поверхности носителя, исключает
крошение микропленок; консервант предохраняет препарат от разрушения при
длительном хранении.
Концентрация диагностической сыворотки в ИХМП является достаточной,
поскольку после эмульгирования в капле физраствора, антитела содержатся в
титре 1:100, что полностью обеспечивает ход реакции. Тем самым
обеспечивается достаточная концентрация антител, снижается, расход
диагностической сыворотки и исключается возможность ее неиспользования. При
этом создаются условия для быстрого растворения ИХМП, контакта ее с
холерными вибрионами и проведения реакции непосредственно на полимерной
пленке.
Готовые ИХМП хранят в темном сухом месте при 4— 7°С в картонных
коробках (срок годности 3 года — срок наблюдения) и по мере надобности ИХМП
используют для определения холерных вибрионов. Для исключения случайного
заражения окружающих предметов ИХМП помещают в чистую чашку Петри. На
поверхность ИХМП наносят каплю физиологического раствора, в которой
растворяют ее. Разведенную сыворотку смешивают с изучаемой культурой
вибрионов, снятой бактериологической петлей с питательной среды. При другом
варианте постановки реакции ИХМП снимают скальпелем с бумажной подложки и
переносят на предметное стекло, растворяют в капле физиологического
раствора и смешивают с изучаемой культурой вибрионов.
При положительной реакции через 1—3 мин появляются зерна агглютината,
окрашенные в зеленый цвет, а капля просветляется. При отрицательной реакции
капля остается гомогенно-мутной.
Использованную часть полимерной пленки отрезают, а оставшуюся часть
пленки с ИХМП сохраняют в той же чашке Петри для дальнейших исследований.
Использование ИХМП в исследованиях вибрионов и других микроорганизмов
позволяет получить статистически достоверные результаты, сэкономить
дорогостоящие диагностические сыворотки, повысить качество и эффективность
Страницы: 1, 2, 3, 4, 5
